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icsl是什么技術?

來源:環保設備     添加時間:2022-12-10 06:52:25

一、icsl是什么技術?

icsl技術即:ICSI 即卵胞漿內單精子顯微注射技術 ,也就是第二代“試管嬰兒”,該技術是借助顯微操作系統將單一精子注射入卵子內使其受精。是在多種顯微授精技術如透明帶鉆孔、透明帶部分切除及透明帶下授精等的基礎上發展起來的,主要針對精子數量嚴重不足引起的不育。

英文縮寫: ICSL

中文全稱: 智能控制系統的實驗室

種用于仿真實體智能化控制的腳本語言CSL。

二、對植物細胞為何不能用顯微注射法?

你好,很高興為你解答。

植物細胞不能用顯微注射法,但動物細胞可以,所以,要找到原因,自然得從植物、動物細胞的不同之處找了,它們有什么不同呢?植物細胞有細胞壁、液泡等,動物細胞有中心體等。

所以呢,從上述那些不同之處,我們可以得出如下結論:

植物細胞有細胞壁,而植物細胞的細胞壁破裂后的原生質體對環境的適應能力極差,極易死亡,所以……你懂的。

植物細胞有液泡,當顯微注射時,如果一不小心注射進了液泡中,那液泡膜是不允許DNA通過的,就是做的無用功,這也是一個原因。

三、顯微注射法的受體細胞不能是胚胎干細胞

事實上,動物一般不講純合還是雜合。動物一般是克隆,即核基因與親本一樣。取小鼠胚胎干細胞的核,另取一個小鼠去核的卵細胞,采用顯微注射,電擊等方法使核與去核卵細胞融合,再把融合細胞植入第三只雌性小鼠體內,讓其發育成完整個體

四、基因治療?

基因治療是指將外源正?;驅氚屑毎?,以糾正或補償因基因缺陷和異常引起的疾病,以達到治療目的。也就是將外源基因通過基因轉移技術將其插入病人的適當的受體細胞中,使外源基因制造的產物能治療某種疾病。從廣義說,基因治療還可包括從DNA水平采取的治療某些疾病的措施和新技術。

基因治療方法

1.基因轉移方法

(1)特異正?;虻姆蛛x與克?。簯弥亟MDNA和分子克隆技術結合基因定位研究成果,已有不少基因并將會有更多人類基因被分離和克隆,這是基因治療的前提,在當代分子生物技術條件下,一般來說,只要有基因探針和準確的基因定位,任何基因都可被克隆。除此,現在既可人工合成DNA探針,還可用DNA合成儀在體外人工合成基因,這些都是在基因治療前,分離克隆特異基因的有利條件。

(2)外源基因的轉移:基因轉移是將外源基因導入細胞內,其轉移方法較多,常用的要有下列幾類:

1)化學法:將正?;駾NA(及其拷貝)與帶電荷物質和磷酸鈣、DEAE-葡萄糖或與若干脂類混合,形成沉淀的DNA微細顆粒,直接傾入培養基中與細胞接觸,由于鈣離子有促進DNA透過細胞有作用,某些化合物可擾亂細胞膜,故可將DNA輸入細胞內,并整合于受體細胞的基因組中,在適當的條件下,整合基因得以表達,細胞亦可傳代。這種方法簡單,但效率極低,一般1000-100000個細胞中只有一個細胞可結合導入的外源基因。要達到治療目的,就需要從病人獲得大量所需的受體細胞。當然,可以通過選擇培養的方法來提高轉化率。

2)物理法:包括電穿孔法和直接顯微注射法。

①電穿孔法:電穿孔法是將細胞置于高壓脈沖電場中,通過電擊使細胞產生可逆性的穿孔,周圍基質中的DNA可滲進細胞,但有時也會使細胞受到嚴重損傷。

②顯微注射法:顯微注射是在顯微鏡直視下,向細胞核內直接注射外源基因,這種方法應是有效的。但一次只能注射一個細胞,工作耗力費時。此法用于生殖細胞時,有效率可達10%。直接用于體細胞卻很困難。在動物實驗中,應用這種方法將目的基因注入生殖細胞,使之表達而傳代,這樣的動物就稱為轉基因動物,目前成功使用得較多的是轉基因小鼠,它可作為繁殖大量后代的疾病動物模型。

③脂質體法:脂質體法是應用人工脂質體包裝外源基因,再與靶細胞融合,或直接注入病灶組織,使之表達。

3)同源重組法:同源重組是將外源基因定位導入受體細胞的染色體上,在該座位因有同源序列,通過單一或雙交換,新基因片段替換有缺陷的片段,達到修正缺陷基因的目的。如在新基因片段旁組裝一Neo基因,則在同源重組后,因有Neo基因,可在含有新霉素的培養基中生長,從而使未插入新基因片段的細胞死亡。對于體細胞基因治療,體外培養細胞的時間不能過長,篩選量大,故在臨床上應用也受限制難以進行。今后如能改進技術,提高重組率,這種定點修正基因的方法仍是有前景的。

4)病毒介導基因轉移:前述的化學和物理方法都是通過傳染方式基因轉移。病毒介導基因轉移是通過轉換方式完成基因轉移,即以病毒為載體,將外源目的基因通過基因重組技術,將其組裝于病毒上,讓這種重組病毒去感染受體宿主細胞,這種病毒稱為病毒運載體。目前應用的有兩種病毒介導基因轉移方法。

①反轉錄病毒載體:反轉錄病毒雖是RNA病毒,但有反轉錄酶,可使RNA轉錄為DNA,再整合到宿主細胞基因組。反轉錄病毒載體有以下的優點首先是具有穿透細胞的能力,可使近100%的受體細胞被感染,轉化細胞效率高;其次,它能感染廣譜動物物種和細胞類型而無嚴格的組織特異性;再者隨機整俁的病毒可長期存留,一般無害于細胞,但也存在缺點:這種載體只能把其DNA整合到能旺盛分裂細胞的染色體,而不適合于那些不能正常分裂的細胞,如神經元。最嚴重的問題是由于病毒自身含有病毒蛋白及癌基因,就有使宿主細胞感染病毒和致癌的危險性。因此,人們有目的地將病毒基因及其癌基因除去,僅留它們的外殼蛋白,以保留其穿透細胞的功能,試圖避免上述缺點。這種改造后的病毒稱為缺陷型病毒。這樣的病毒中的反轉錄酶可將RNA轉化為DNA,有助于該DNA順利進入宿主細胞的基因組,而該病毒則死亡。由于病毒整合基因組是隨機的,所以還是可能激活細胞的原癌基因,以及因隨機插入發生插入突變。在反轉錄病毒載體中,最常用于人類的是莫洛尼鼠白血病病毒,其人工構建的結構。

②DNA病毒介導載體:DNA病毒包括腺病毒、SV40、牛乳頭瘤病毒、皰疹病毒等,一般認為這類病毒難于改造成缺陷型病毒。牛乳頭瘤病毒重組后,可不插入宿主染色體中引起插入突變,又可在宿主染色體外獨立復制,并表達出基因產物。有人發現,因缺少E1區而致復制缺陷的腺病毒,可在表達E1基因的細胞中繁殖。后來證明,載有外源DNA的復制缺陷腺病毒呈現相同繁殖的特點。1993年美法等國成功采用腺病毒載體進行心、腦、肺、肝內膽管和肌肉組織的體內基因轉移。它代表了基因治療的新方向。美國設計了一個新的腺病癥載體,它是用一個化學連接器即賴氨酸鏈將DNA栓在病毒外殼上,這樣組成的運輸器,通過一個表面抗體而進入細胞核,使宿主基因與治療基因共同表達。這個新病毒載體稱為腺病毒多賴氨酸DNA復合體。采用復制缺陷的腺病毒進行基因治療有以下優點:

①該病毒可感染分裂和非分裂的細胞,并能得到大量基因產物,對神經細胞、心肌細胞等基因缺陷的糾正有特殊意義;

②病毒顆粒相對穩定,并易于純化和濃縮,且感染力不降低;

③可有效轉導多種靶細胞后而少游離于細胞基因組外,并持續表達;

④已用于基因治療的Ad5屬腺病毒C亞群,無致癌性。前述的新腺病毒載體還有一大優點是可以成功地運載48000bp的基因,而其它病毒只能運輸70 00bp的基因。這些優點顯示了腺病毒介導載體的廣闊應用前景。

2.選擇靶細胞的原則

這里所指的靶細胞是指接受轉移基因的體細胞。

選擇靶細胞的原則是:

①必須較堅固,足以耐受處理,并易于由人體分離又便于輸回體內;

②具有增殖優勢,生命周期長,能存活幾月至幾年,最后可延續至病人的整個生命期;

③易于受外源遺傳物質的轉化;

④在選用反轉錄病毒載體時,目的基因表達最好具有組織特異性的細胞。目前使用得較多的是骨髓干細胞、皮膚成纖維細胞、肝細胞、血管內皮細胞和肌細胞等。許多遺傳病與造血細胞有關,故可用于如β地貧、嚴重復合免疫缺陷病等的基因治療。皮膚成纖維細胞易于移植和從體內分離,又可在培養中生長,并易存活,故有人用之于乙型血友病的基因治療。有不少遺傳病表現了肝細胞功能缺陷,因此,在家族性高膽固醇血癥的治療中,有將低密度脂蛋白(LDL)受體基因轉移至肝細胞的嘗試。在動物實驗中已證明:β-半乳糖苷酶基因、ADA基因、小肌營養不良蛋白(minidystrophin)基因都已證明能在肌細胞中表達。

編輯本段基本程序

基因治療

(一)治療性基因的獲得 (二)基因載體的選擇 (三)靶細胞的選擇 (四)基因轉移方法 (五)轉導細胞的選擇鑒定 (六)回輸體內

編輯本段基本步驟

目的基因的轉移

基因治療

在基因治療中迄今所應用的目的基因轉移方法可分為兩大類:病毒方法和非病毒方法?;蜣D移的病毒方法中,RNA和DNA病毒都可用為基因轉移的載體。常用的有反轉錄病毒載體和腺病毒載體。轉移的基本過程是將目的基因重組到病毒基因組中,然后把重組病毒感染宿主細胞,以使目的基因能整合到宿主基因組內。非病毒方法有磷酸鈣沉淀法、脂質體轉染法、顯微注射法等。

 


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