Westernblot法(即蛋白質印跡法)是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中時常會用到的一種實驗方法。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中的表達情況的信息。(如:伯樂生命的印跡膜上總蛋白檢測)。Westernblot法顯色的方法只要有四種,分別是放射自顯影、底物化學發光ECL、底物熒光ECF與底物DAB呈色。
先用imagej分析灰度值,將數據標準化后(以正常組為1或者100%),作柱狀圖。
western blot和ELISA的基本原理是一樣的,都是免疫結合反應的原理。差別主要是技術方法,免疫結合的模式,檢測的目的等 western blot需要先電泳后轉膜,然后免疫結合,雖然操作復雜但不需要很高級的儀器設備 ELISA沒有這么復雜的操作,但是需要酶標儀這樣比較貴的儀器 western blot的免疫模式基本是抗原結合抗體,抗體結合二抗酶 ELISA模式更加不固定一些,可以是抗原 抗體 二抗酶,也可以是抗原 抗體 抗原酶,或者抗體 抗原 抗體酶等等 western blot更偏向于定性的檢測,定量也只能是通過比較的半定量,誤差可能很大 ELISA既可以定性也能非常精確的定量
Elisa最終通過標準曲線及吸光值來得出待測樣品當中某種蛋白的含量;Western通過條帶灰度來得出某種蛋白表達的相對值。
簡而言之,ELisa能得出具體數值,如多少mg/ml;而Western不能,只能通過條帶灰度值進行幾組樣品之間的比較。但是二者的原理都是利用抗原抗體反應。