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紅豆杉樹的樹皮里含有微量的紫杉醇。從紫杉植物中提取紫杉醇的簡化方法紅豆杉Taxus又名紫杉，也稱赤柏松，生于海拔1000～1200m處的山地，是世界上公認的瀕臨滅絕天然珍稀植物，從其根、皮、莖、葉中提取的紫杉醇taxol是目前世界上最有效的抗癌藥物之一。
全球每年大約需要1500～2500kg紫杉醇，而1kg樹皮僅能提取50～100mg。10-脫乙酰巴卡亭Ⅲ又稱10-脫乙?；鶟{果赤霉素Ⅲ，10-deacetylbaccatinⅢ，10-DABⅢ為有抑制腫瘤作用的紫杉烷二萜類化合物。
Bissery等報道，可利用10-DABⅢ合成具有比紫杉醇更高抗癌活性的多烯他賽docetaxel。紫杉醇主要存在于樹桿和樹皮中，10-DABⅢ主要存在于樹葉中，其含量大大高于紫杉醇的含量。紅豆杉是國家珍稀保護植物，生長緩慢，如果直接從紅豆杉樹皮中提取紫杉醇，不僅資源有限，而且不利于資源保護。
以10-DABⅢ為原料采用酶催化半合成工藝方法來制備紫杉醇，可大大簡化合成過程，使紫杉醇骨架修飾所需步驟更少，操作更簡單，提高了紫杉醇合成的選擇性和生產率，進而為在更大規模上進行紫杉醇生產提供了技術支持，最終使紫杉醇的化學合成半合成的產業化有了實現的可能。
目前文獻報道從各種紫杉植物中提取紫杉醇的方法，均需經過繁冗的分離過程。本實驗采用了一種適合于以各種紫杉植物樹葉或樹枝做原料，通過極性梯度溶劑萃取的方法逐步脫除大量不相干雜質，得到合成紫杉醇的前體10-DABⅢ的方法，然后通過反相層析柱加成，即可獲得抗癌活性成分紫杉醇；材料與方法1材料與儀器南方紅豆杉Taxusmairei枝葉取自浙江寧海紅豆杉種植基地，8年樹齡。
10-DABⅢ對照品為Sigma公司產品，純度98％；所用甲醇；乙醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷、氯仿、正己烷、石油醚、乙腈等均為分析純試劑。JJ一1精密增力電動攪拌儀，江蘇金壇市江南儀器廠；SENCOR一201旋轉蒸發儀，上海申順生物科技有限公司；玻璃硅膠柱為2cm×40cm，杭州常盛科教器具廠；UV一2802PC／PCS型分光光度計，UNICO上海儀器有限公司；Sigma一3K18低溫離心機4℃，轉速18000rmin；LabAlliance高效液相色譜儀美國SSI公司。
2實驗方法取南方紅豆杉枝葉研磨成細粉，于燥保存。稱取100g紅豆杉細粉，45℃烘干，石油醚預處理，5L甲醇冷浸，輔以攪拌，超聲40min，反復2次。浸漬液過濾，減壓濃縮至100mL。加入75mL正己烷萃取分液，重復操作2～3次。
棄去正己烷層，萃余液旋干溶劑，制成浸膏。加入氯仿與水的混合液1：1反復提取。氯仿層減壓濃縮至10～15mL上柱，用硅膠正相色譜柱分離。分段收集洗脫液，紫外監測，收集有效段合并濃縮，在甲醇／水中重結晶。
3分析測試方法采用反相高效液相色譜RPDHPLC方法檢測。分析柱為KromasilC18柱250mm×4。6mm，5μm，流動相為乙腈-水30：70，流速為2。0mLmin，每次進樣體積為10μl，進樣間隙用純乙腈對柱子進行梯度沖洗。
紫杉醇最大吸收波長為227nm，檢測器測定波長為232nm，溫度30℃，相關數據計算均采用峰面積歸一化法。結果1預處理由于紅豆杉枝葉中含有大量蠟質、植物色素諸如葉綠素等低極性雜質，故在提取前應首先加入低極性溶劑如正己烷、石油醚浸泡脫脂，以除去大量存在的此類非極性雜質，簡化后續操作。
該法可除去紅豆杉枝葉中多達72％的極性比10-DABⅢ小且可溶于正己烷的雜質。2有機溶劑粗提目前用于紫杉烷類物質提取的最普通的初級萃取劑是乙醇甲醇和水，Xu等采用的是體積比95：5的甲醇和二氯甲烷的混合物，萃取時間為35~60min；而Hoke等和Powell等都選擇的是純甲醇，所需萃取時間為16～48h。
將南方紅豆杉枝葉的細粉在45℃烘干，甲醇浸漬，攪拌過夜。在攪拌的不同時間內其提取出的10-DABⅢ的含量?？梢钥闯?，有機溶劑粗提時的浸漬攪拌時間應以12h左右為佳。3初級萃取將甲醇萃取液減壓旋蒸至干，得浸膏。
用10倍體積以甲醇浸膏的量為基準的純凈水分幾次全部溶解，因目標產物10-DABⅢ不溶于水，故而形成懸浮液。用石油醚或正己烷反復萃取，因目標產物不溶于非極性溶劑正己烷中，經此可基本去除極性比10-DABⅢ小的雜質。
在大多數情況下，還須對甲醇粗提物進行萃取操作。一般是在初級萃取物中加入二氯甲烷和水的混合物，即液液萃取，該方法可有效除去萃取液中50％質量比的非紫杉烷類物質。但實驗發現要嚴格掌握好甲醇、二氯甲烷、水三者的比例，否則會出現提取不徹底，在兩相中均含有目標產物，且還會有乳化現象發生。
本實驗中是采用加入氯仿／水的混合溶液1：1將浸膏完全溶解然后進行液液萃取。操作中應按照每次向水相中加入4～5倍體積的氯仿來進行，并輕輕振蕩分頁漏斗，以避免出現嚴重的乳化現象。因實驗中發現二氯甲烷在用堿液和水洗時不可避免嚴重乳化，造成目標產物損失難以回收，而氯仿因與目標產物極性相匹，對10-DABⅢ的溶解性更高，與水相分層界面明顯，可在更大程度上實現目標產物10-DABⅢ與極性水溶性雜質的分離。
4重結晶將已檢測確認的洗脫液收集，濃縮，制成浸膏。在少量乙腈中重結晶。濾出的殘渣再用甲醇／水洗滌2～3次，即可得到10-DABⅢ的晶體，烘干，稱重，共計79。16mg。10-DABⅢ純度達到91％，該步收率可達72％。
由于單一萜類化合物在植物中含量低，需要較多分離步驟才能純化出來。因此，采用有效的提取方法和縮短分離步驟提高每步的收率是成功的關鍵。本研究利用萃取和層析方法相結合，使繁瑣的分離步驟大為縮減，工藝路線為：紅豆杉枝葉采集、粉碎，45℃烘于，石油醚預處理后用甲醇浸漬，同時輔以攪拌、超聲。
然后過濾，濾液旋蒸以縮小體積，濃縮液用正己烷反復萃取之后再蒸干制成浸膏。浸膏用氯仿／水反復抽提，萃取分液，得到氯仿的抽提物再上柱細分。收集含有10-DABⅢ的洗脫段，旋蒸去除溶劑，適量乙腈溶解，進行重結晶，再用乙醇／水反復洗滌晶體，得到10-DABⅢ的純品。
本工藝中采用的南方紅豆杉樹葉中10-DABⅢ的含量經測定為在1‰，得到的紫杉醇合成的前體物10-DABⅢ純度大于90％，總收率達到7。9％，與文獻相比較說明實驗采用的原料及分離和純化工藝都是可行的。
但由于本實驗目前還處于實驗室研究階段，在重結晶操作環節中尚存在一些問題，如怎樣去除殘留溶劑對重結晶的影響及晶形的改善等還都需要進一步的研究。
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