答:一.mCIM實驗操作步驟
1. 取1ul接種環滿環(腸桿菌科細菌)或10ul接種環滿環(銅綠假單胞菌)的生長于血瓊脂平板上的過夜培養純菌落,于2ml TSB肉湯中;
2.震蕩混勻10-15秒
3. 每管放入一張含10ug美羅培南的無菌紙片,確認紙片浸沒于菌懸液中
4. 35℃±2℃大氣環境孵育4小時±15分鐘
5. 孵育結束時,立即用營養肉湯或生理鹽水制備0.5麥氏濁度的大腸埃希ATCC 25922菌懸液(直接菌懸法)
6. 菌懸液制備和平板涂布必須15分鐘內完成,干燥3-10分鐘;
7. 用10ul接種環將美羅培南紙片從TSB肉湯中取出,將紙片貼于試管內壁,輕輕按壓以擠去紙片上多余水分,然后將紙片取出貼于已涂布有大腸埃希菌ATCC25922的MHA平板上。100mm的MHA平板最多貼4張紙片,150mm的MHA平板最多貼8張紙片。
8. 倒置平板,35℃±2℃大氣環境孵育18-24小時
9. 量取抑菌圈直徑
二.eCIM實驗操作步驟
1. 取第二支含2ml TSB的肉湯管,管壁上標記細菌名稱;加入20ul 0.5M EDTA溶液于2ml TSB中,EDTA最終濃度為5mM;
2. 剩下步驟同mCIM實驗步驟1-9。mCIM和eCIM實驗同步進行;
3. mCIM和eCIM實驗管中的美羅培南紙片貼于同一塊已涂布有大腸埃希菌ATCC 25922的MHA平板上。
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