金標法:又稱膠體金法、一步法,醫學上的名稱為斑點免疫金滲濾試驗。.金標法是一種常用的標記技術,是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術。
金標法是國際上較為先進的體外診斷方法,近年來金標法(膠體金法)已在各種生物學研究中廣泛使用,在臨床使用的免疫印跡技術幾乎都使用其標記,同時在流式、電鏡、免疫、分子生物學以至生物芯片中都可能例用到。
它擁有如下幾個特點:
(1)靈敏度高;
(2)特異性強;
(3)快速;
(4)簡便;
(5)準確e78988e69d率高。
1971年Faulk 和Taytor將膠體金引入免疫化學,此后免疫膠體金技術作為一種新的免疫學方法,在生物醫學各領域得到了日益廣泛的應用。目前在醫學檢驗中的應用主要是免疫層析法( immunochromatogra-phy)和快速免疫金滲濾法(Dot-immuogold filtration assay DIGFA),用于檢測 HBsAg、HCG 和抗雙鏈DNA抗體等,具有簡單、快速、準確和無污染等優點。
免疫膠體金技術的基本原理:
膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下,可聚合成一定大小的金顆粒,并由于靜電作用成為一種穩定的膠體狀態,形成帶負電的疏水膠溶液,由于靜電作用而成為穩定的膠體狀態,故稱膠體金。膠體金在弱堿環境下帶負電荷,可與蛋白質分子的正電荷基團形成牢固的結合,由于這種結合是靜電結合,所以不影響蛋白質的生物特性。
膠體金除了與蛋白質結合以外,還可以與許多其它生物大分子結合,如SPA、PHA、ConA等。根據膠體金的一些物理性狀,如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應,加上結合物的免疫和生物學特性,因而使膠體金廣泛地應用于免疫學、組織學、病理學和細胞生物學等領域。
膠體金標記,實質上是蛋白質等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。吸附機理可能是膠體金顆粒表面負電荷,與蛋白質的正電荷基團因靜電吸附而形成牢固結合。用還原法可以方便地從氯金酸制備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。這種球形的粒子對蛋白質有很強的吸附功能,可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價結合,因而在基礎研究和臨床實驗中成為非常有用的工具。
免疫金標記技術(Immunogold labelling techique) 主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性,在金標蛋白結合處,在顯微鏡下可見黑褐色顆粒,當這些標記物在相應的配體處大量聚集時,肉眼可見紅色或粉紅色斑點,因而用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中,這一反應也可以通過銀顆粒的沉積被放大,稱之為免疫金銀染色。
分子生物實驗室可分為樣品保存、樣品前處理、過程分析、清洗滅菌四個流程,不同的工作流程需要不同的儀器,分子生物實驗室常用的儀器設備有:
一、樣品保存
1、 超低溫冰箱:低溫保存疫苗、菌種、生物樣本等
2、 液氮罐:長期活性保存疫苗、菌毒種、細胞
3、 藥品冷藏箱:用于冷藏保存藥品、試劑、生物制品和疫苗
二、樣品前處理
1、 移液器:定量轉移液體的器具
2、 離心機: 液固或液液顆粒分離
3、 凍干機: 凍結的水分子直接升華水蒸氣
4、 均質儀: 提取樣品中DNA/RNA/蛋白質
5、 培養箱: 培養微生物、植物和動物細胞
6、 生物安全柜: 實驗操作中空氣凈化負壓安全裝置
7、 超凈工作臺: 局部工作區域潔凈度
三、過程分析
1、 PCR儀:用于傳染病的診斷、基因復制以及親子鑒定
2、 酶標儀:酶聯免疫吸附試驗的專用儀器
3、 核酸提取儀:核酸提取試劑自動完成樣本核酸提取
4、 暗箱式紫外分析儀:于核酸、蛋白電泳凝膠,薄層層板結果的觀察分析
5、 電泳儀:用于DNA 測序
四、清洗滅菌
1、 高壓滅菌鍋:實驗前后殺菌
2、超聲波清洗機:清洗實驗器具及玻璃器皿
請教高人:一個最小最小的、只作DNA提取和擴增的分子生物學實驗室需要什么儀器???請列明儀器名稱、推薦型號和大概價格。
如果量很小的話,可以這樣
PCR儀一臺 用作擴增
高速離心機一臺(可達12000rpm即可)
電泳儀一臺
可以跑PAGE和瓊脂糖的槽
紫外觀測儀器 看膠
超凈工作臺,接菌用
大搖床 培養菌用
脫色搖床 如果需要染膠的話用
細菌培養箱 細菌生長需要恒溫
水浴鍋或電熱板 很有用,呵呵
然后就是移液器一套3-4支,槍頭1000ul、200ul、20ul若干
最好還有滅菌鍋,槍頭需要滅菌使用才準確。
還有可以-20度的冰箱,保存DNA,一般菌種保存也差不多,有條件可以上-70度冰箱。
電子精密天平 稱藥品,配培養基等
微波爐 用來制膠很方便的。
凝膠成像系統 掃膠用,可以將膠圖保存為圖像文件存檔。
暫時就想這么多,我們實驗室大致就這樣。價錢不清楚,可以找生物公司去要他們的單子,多要幾家的,選擇對比下再買。
祝你成功
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