實驗室用公司試劑盒提取質粒,一般采用的是堿裂解法。比如從大腸桿菌的菌液中提取,基本原理是先加入RNA酶,把RNA去掉,然后用堿裂解菌體,用酸平衡,并且SDS和蛋白質結合形成沉淀,順便把與蛋白結合的基因組DNA沉淀下來。
最后上清中含有質粒DNA,把它過柱洗脫下來溶到水中就完成了質粒的提取。
從具體操作方法分可以分為堿裂解法、煮沸法、牙簽法等。
在氫氧化鈉(pH12.0-12.6堿性環境)和去污劑SDS的作用下,細菌蛋白質變性,細胞破裂,細菌染色體DNA變性,雙鏈DNA氫鍵斷裂,DNA雙螺旋結構遭破壞而發生變形。
但由于質粒DNA相凳伍對分子質量較小,公價閉環的DNA雖然變性但仍處于拓撲纏繞狀態,呈環狀超螺旋結構,即使在高堿性pH條件下,兩條互補鏈也不會完全分離。
將pH調至中性并有高鹽存在的條件下,變性質粒DNA又恢復到原來的構型,而大部分染色體DNA和蛋白質難以復性,與細胞碎片、蛋白質、SDS等形成不溶性復合物。
通過離心沉淀,細胞破碎、染色體DNA及大部分蛋白質等可被出去,而質粒DNA及相對分子質量較小的RNA仍為可溶狀態?;祀s的RNA可用RNA酶消除,再用酚/氯仿處理,可除去殘留蛋白質。在鹽和乙醇存在的條件下,進一步離心沉淀質粒DNA。
擴展資料
分類:
根據質粒能否通過罩凳細菌的接合作用,可分為接合性質粒和非接合性質粒。接合性質粒物粗旅帶有與接合傳遞有關的基因。非接合質粒在一定條件下通過與其共存的接合質粒的誘動或轉導而傳遞。
根據質粒在細菌內的復制類型可分為兩類:嚴緊控制型和松弛控制型。嚴緊控制復制型質粒的復制酶系與染色體DNA復制共用,只能在細胞周期的一定階段進行復制,當細胞染色體停止復制時,質粒也就不再復制。
松弛控制復制型的質粒的復制酶系不受染色體DNA復制酶系的影響,在整個細胞生長周期中隨時都可以復制,在染色體復制已經停止時質粒仍能繼續復制。
根據質粒的不相容性,可分為不相容性和相容性。不相容性指結構相似、密切相關的質粒不能穩定地共存于同一宿主細菌內的現象,反之為相容性。常用于流行病學的調查。
參考資料來源:百度百科-質粒抽提